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NCI-H1703(人肺鳞癌细胞)的培养方法!

2022-01-21作者:百欧博伟浏览次数:14  来源:北京百欧博伟生物技术有限公司

NCI-H1703(人肺鳞癌细胞)的培养方法!

 

一、细胞简介

平台编号:bio-73331

拉丁属名:NCI-H1703

规格:1×10⁶cells/T25培养瓶

细胞名称:NCI-H1703(人肺鳞癌细胞) 

种属:人

年龄(性别):男;54岁

生长特性:贴壁

细胞形态:上皮细胞样

背景描述:NCI-H1703细胞是于1987年建系,源自一位54岁患有非小细胞肺癌的白人男性,该患者为吸烟者。

生长培养基:RPMI-1640(货号:PM150110)+10% FBS(货号:164210-500)+1% P/S(货号:PB180120)

培养条件:气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃

细胞用途:仅供科研使用。

注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。

 

二、细胞介绍

该细胞1987年建系,源自一位54岁患有非小细胞肺癌的白人男性,该患者为吸烟者。

 

三、细胞特性

1)来源:肺癌

2)形态:上皮细胞样,贴壁生长

3)含量:>1x106 个/mL

4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

 

四、细胞的运输和保存

使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在1000RPM,常温条件下,离心5min后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T25培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

                   

五、细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备:

1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO),90%;优质胎牛血清,10%。

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

2、细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

 

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4、将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

 

六、注意事项

1、收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2、收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。

4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 

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