华体会官方

技术中心
technology
CENTER

人外周血单个核细胞的说明及分离!

2022-01-13作者:百欧博伟浏览次数:21  来源:北京百欧博伟生物技术有限公司

人外周血单个核细胞的说明及分离!

 

一、基本信息

细胞名称:Human PBMC(人外周血单个核细胞)

生长类型:悬浮细胞

培养基:90% RPMI1640+10% FBS

 

二、简介

 

人外周血单个核细胞分离自外周血。外周血单个核细胞( PBMC )即外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。目前,主要的分离方法是密度梯度离心法,因为血液中各有形成分的比重存在差异,因此得以分离出不同的细胞。人外周血单个核细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来,细胞总量约为5 x105cells/瓶;细胞纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV. 支原体、细菌、酵母和真菌等。

 

三、分离步骤

 

1、取新鲜抗凝 全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液,用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。

 

2、在离心管中加入适量分离液,将稀释后的血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。

 

3、室温,水平转子500~1000g,离心20~30min(血液的体积越大所需的离心力越大,离心时间越长,最佳的分离条件需摸索,离心转速最大不超过1200g)。

 

4、离心后将出现明显的分层:最上层是稀释的血浆层,中间是透明的分离液层,血浆与分离液之间的白膜层即为单个核细胞层,离心管底部是红细胞与粒细胞。

 

5、小心的吸取白膜层细 胞到15mL洁净的离心管中,10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g,离心10min。

 

6、弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。

 

7、重复步骤6

 

8、弃上清,细胞重悬备用。

 

四、人外周血单个核细胞的运输和保存

 

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

 

1、1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

 

2、T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

 

中国微生物菌种查询网自设细胞系板块,是细胞株提供中心,专业提供代次低、周期短、活性好的细胞株。与国内外多家研制单位,生物医药,第三方检测机构,科研院所有着良好稳定的长期合作关系!欢迎广大客户来询!


征稿、访谈、专题合作邮件:
tougao@tlvapt.com
版权与免责声明:
凡本网注明“来源:华体网 ”的所有作品,版权均属于华体会信息技术有限公司 -中国华体网 合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。 已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:中国华体网 ,http://tlvapt.com”,违反上述声明者,本网将追究相关法律责任。 本网转载并注明自其它来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,我们将及时作出删除或修改,否则视为放弃相关权利。
转载本站原创文章请注明来源:华体网
推荐展会
2021【通用设备】广州国际及金属加工液展览会
时间:2021年09月16日-18日
主办:广州巨浪有限公司
地点:
粤港澳大湾区生态环境技术与设备展览会
时间:2021年05月13日-15日
主办:中国生态环境产业协会,中国供排水和水处理协会,粤港澳大湾区生态及景观联盟 ,深圳市生态学会
地点:
2021粤港澳大湾区水处理技术设备展览会
时间:2021年05月13日-15日
主办:
地点:
2021第十七届上海国际压铸、铸造展览会
时间:2021年11月30日-02日
主办:华东地区铸造协会,上海市汽车行业协会汽车铸造分会,上海华野会展有限公司
地点: 上海市天目中路240号沪金大楼402室
扫码登陆 华体网 手机版
微信公众号